绿魔大战后，蜘蛛侠帕克(托比？马奎尔(托比·马奎尔饰)忍痛拒绝了他唯一的爱人玛丽(克尔斯滕？邓斯特·克尔斯滕·邓斯特)，因为蜘蛛侠的身份会给自己和亲人带来极大的危险，帕克决定独立承担蜘蛛侠的责任。帕克一直忙于应对各种挑战:学习超能力的灵活运用；在超级英雄和普通大学生的双重身份下隐藏自己，小心翼翼的活着等等。帕克越来越迷恋玛丽，但作为蜘蛛侠，他无法对玛丽敞开心扉。好朋友哈利因为误会蜘蛛侠，一直在到处和蜘蛛侠作对；唯一的亲人阿姨也对蜘蛛侠的真实身份产生了怀疑。与此同时，一个新的挑战出现了:邪恶而强大的章鱼博士。帕克在各种压力下肩负起蜘蛛侠的使命。